Eletroforese

No dia 11 de outubro de 2012, no laboratório de Bioquímica da Faculdade UnIcesp Promove de Brasília, foi realizada uma aula prática ministrada pela Profª MSC Drª. Érica Martins (Foto), onde foi desenvolvida uma técnica laboratorial chamada de eletroforese.
 

 

Anteriormente no dia 29 de setembro no mesmo laboratório havia sido coletado, em aula prática, amostras de sangue de dois alunos da turma de biomedicina do 3º semestre, onde na oportunidade também foi desenvolvida uma técnica chamada  PCR.

Foi mencionado que a eletroforese é uma técnica de separação de partículas de acordo com sua carga elétrica e peso molecular. Que permite a separação de frações de moléculas orgânicas como RNA, DNA, proteínas e enzimas, pela migração destas em um gel durante a aplicação de um potencial elétrico.

O princípio da eletroforese utilizada para separação de DNA, por exemplo, baseia-se na carga total negativa do DNA (dada pelos oxigênios do grupamento fosfato). Assim, fragmentos de DNA obtidos da técnica de PCR, podem ser separados pela aplicação de uma voltagem. Ao final do processo, as cadeias de DNA estarão próximas ao polo positivo.

Moléculas de menor peso molecular terão mais facilidade de migrar pelo gel do que as de maior peso molecular, e percorrerão uma distância maior ficando mais próximas do pólo positivo.

Na técnica, utilizou-se um cuba com dois compartimentos separados. Os eletrodos determinam os pólos positivo e negativo em cada compartimento. Neles, coloca-se uma solução salina que conduz eletricidade. Entre os compartimentos, ajusta-se o gel que deve ficar submerso.

As amostras (de DNA, por exemplo) foram colocadas com pipetas em pequenos poços no gel, que são feitos com um pente durante a sua preparação. A distância que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicação, é comparada com a distância que outros fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel. Esses fragmentos são os chamados de ladders (marcadores de peso molecular), misturas de segmentos de DNA de tamanhos variáveis e equidistantes entre si, e que são aplicados em um poço no gel no início do processo.

Verificou-se que a separação das moléculas teve sua eficácia determinada tanto pela concentração do polímero como pela intensidade da voltagem e amperagem aplicadas.

1 - Gel; 2 - Aplicação do marcador; 3 - Aplicação das amostras; 4 - Indução de corrente elétrica; 5 - Deslocamento e separação dos fragmentos; 6-Eletroforese realizada.